کیت DNA TGuide Cells/Tissue Genomic DNA

A-1 غلظت کم سلولها یا ویروس در نمونه اولیه-غنی سازی غلظت سلولها یا ویروسها.

A-2 لیز کافی نمونه ها-نمونه ها کاملاً با بافر لیز مخلوط نشده اند. پیشنهاد می شود که 1-2 بار با پالس گرداب کاملاً مخلوط شود. لیز سلولی ناکافی ناشی از کاهش فعالیت پروتئیناز K. پیشنهاد می شود که بافت را به قطعات کوچک تقسیم کرده و مدت زمان حمام را افزایش دهید تا تمام باقی مانده موجود در لیزت حذف شود.

A-3 جذب DNA کافی نیست. -قبل از انتقال لیزات به ستون چرخش ، هیچ اتانول یا درصد کمی به جای 100 درصد اتانول اضافه نشده است.

A-4 مقدار pH بافر شستشو بسیار کم است. -PH را بین 8.0-8.3 تنظیم کنید.

اتانول باقیمانده در ماده شوینده

- باقیمانده بافر شستشو PW در ماده شوینده وجود دارد. اتانول را می توان با سانتریفیوژ ستون چرخش به مدت 3-5 دقیقه حذف کرد و سپس در دمای اتاق یا انکوباتور 50 درجه سانتی گراد به مدت 1-2 دقیقه قرار داد.

A-1 نمونه تازه نیست. - یک DNA نمونه مثبت را به عنوان کنترل استخراج کنید تا مشخص شود آیا DNA موجود در نمونه تخریب شده است یا خیر.

A-2 پیش درمان نامناسب. - ناشی از خرد کردن بیش از حد نیتروژن مایع ، بازیابی رطوبت یا مقدار زیاد نمونه.

پیش تیمارها باید برای نمونه های مختلف متفاوت باشد. برای نمونه های گیاهی ، مطمئن شوید که نیتروژن مایع را کاملاً آسیاب کرده اید. برای نمونه های حیوانی ، همگن کنید یا در نیتروژن مایع کاملاً آسیاب کنید. برای نمونه هایی با دیواره سلولی که شکستن آنها سخت است ، مانند باکتری G+ و مخمر ، پیشنهاد می شود از لیزوزیم ، لیتیکاز یا روشهای مکانیکی برای شکستن دیواره های سلولی استفاده شود.

4992201/4992202 Plant Genomic DNA Kit یک روش مبتنی بر ستون را اتخاذ می کند که برای استخراج به کلروفرم نیاز دارد. این به ویژه برای نمونه های مختلف گیاهی و همچنین پودر خشک گیاه مناسب است. کیت گیاهی Hi-DNAsecure نیز بر اساس ستون است ، اما بدون نیاز به استخراج فنل/کلروفرم ، و آن را ایمن و غیر سمی می کند. برای گیاهانی با پلی ساکاریدهای بالا و پلی فنول مناسب است. 4992709/4992710 DNAquick Plant System یک روش مبتنی بر مایع را اتخاذ می کند. استخراج فنل/کلروفرم نیز لازم نیست. روش تصفیه ساده و سریع است و هیچ محدودیتی برای مقدار شروع نمونه وجود ندارد ، بنابراین کاربران می توانند مقدار را با توجه به نیازهای تجربی به صورت انعطاف پذیر تنظیم کنند. اندازه بزرگ قطعات gDNA را می توان با عملکرد بالا بدست آورد.

DNA ژنومی از حجم های مختلف نمونه خون کامل انسان توسط کیت DNA TIANamp Blood DNA استخراج شد. نتایج به شرح زیر است. نتایج فقط به عنوان مرجع ذکر شده اند ، نتایج واقعی استخراج بستگی به شرایط نمونه ها دارد.

استخراج DNA لخته خون را می توان با استفاده از معرفهای ارائه شده در این دو کیت با تغییر پروتکل به دستورالعمل خاص استخراج DNA لخته خون انجام داد. کپی نرم پروتکل استخراج DNA لخته خون را می توان در صورت درخواست صادر کرد.

نمونه تازه را با 1 میلی لیتر PBS ، نرمال سالین یا بافر TE تعلیق کنید. نمونه را کاملاً با هموژنایزر همگن کنید و رسوب را تا انتهای لوله با سانتریفیوژ جمع آوری کنید. مایع رویی را دور بریزید و رسوب را با 200 میکرولیتر GA بافر GA مجدداً معلق کنید. مطابق دستورالعمل می توان تصفیه DNA زیر را انجام داد.

برای تصفیه gDNA در نمونه های پلاسما ، سرم و مایع بدن ، TIANamp Micro DNA Kit توصیه می شود. برای تصفیه gDNA ویروس از نمونه های سرم/پلاسما ، کیت DNA/RNA ویروس TIANamp توصیه می شود. برای تصفیه gDNA باکتریایی از نمونه های سرم و پلاسما ، کیت DNA TIANamp Bacteria توصیه می شود (لیزوزیم باید برای باکتری های مثبت گنجانده شود). برای نمونه بزاق ، کیت DNA Hi-Swab و کیت DNA باکتری TIANamp توصیه می شود.

کیت گیاهی DNAsecure یا سیستم گیاهی DNAquick برای استخراج ژنوم قارچ توصیه می شود. برای استخراج ژنوم مخمر ، کیت DNA مخمر TIANamp توصیه می شود (لیتیکاز باید خود آماده شود).