کیت RNAclean

لیز یا همگن سازی سلول A-1 کافی نیست

---- کاهش استفاده از نمونه ، افزایش میزان بافر لیز ، افزایش همگن سازی و زمان لیز.

A-2 مقدار نمونه بسیار زیاد است

---- مقدار نمونه مورد استفاده را کاهش دهید یا مقدار بافر لیز را افزایش دهید.

A-1 لیز یا همگن سازی کافی سلول ها

---- کاهش استفاده از نمونه ، افزایش میزان بافر لیز ، افزایش همگن سازی و زمان لیز.

A-2 مقدار نمونه بسیار زیاد است

---- لطفاً به حداکثر ظرفیت پردازش مراجعه کنید.

RNA A-3 به طور کامل از ستون خارج نشده است

---- پس از افزودن آب بدون RNase ، آن را چند دقیقه قبل از سانتریفیوژ بگذارید.

A-4 اتانول در ماده شوینده

---- بعد از آبکشی مجدد سانتریفیوژ کنید و تا جایی که ممکن است بافر شستشو را بردارید.

محیط کشت A-5 Cell به طور کامل حذف نشده است

---- هنگام جمع آوری سلول ها ، لطفاً تا جایی که ممکن است محیط کشت را حذف کنید.

A-6 سلولهای ذخیره شده در RNAstore بطور موثر سانتریفیوژ نمی شوند

---- چگالی RNAstore بیشتر از متوسط ​​محیط کشت سلولی است. بنابراین نیروی گریز از مرکز باید افزایش یابد. پیشنهاد می شود سانتریفیوژ در 3000x g انجام شود.

A-7 محتوای RNA کم و فراوانی در نمونه

---- از یک نمونه مثبت برای تعیین اینکه آیا عملکرد کم ناشی از نمونه است ، استفاده کنید.

A-1 مواد تازه نیستند

---- بافتهای تازه باید بلافاصله در نیتروژن مایع ذخیره شوند یا بلافاصله در معرف RNAstore قرار داده شوند تا از اثر استخراج اطمینان حاصل شود.

A-2 مقدار نمونه بسیار زیاد است

---- مقدار نمونه را کاهش دهید.

آلودگی A-3 RNasen

---- اگرچه بافر ارائه شده در کیت حاوی RNase نیست ، اما به راحتی می توان RNase را در طول فرآیند استخراج آلوده کرد و باید با احتیاط از آن استفاده کرد.

آلودگی الکتروفورز A-4

---- بافر الکتروفورز را جایگزین کنید و مطمئن شوید مواد مصرفی و Loading Buffer عاری از آلودگی RNase باشند.

A-5 بارگذاری زیاد برای الکتروفورز

---- مقدار بارگیری نمونه را کاهش دهید ، بارگیری هر چاه نباید از 2 میکروگرم تجاوز کند.

مقدار نمونه A-1 بسیار زیاد است

---- مقدار نمونه را کاهش دهید.

A-2 برخی از نمونه ها دارای محتوای DNA بالا هستند و می توان آنها را با DNase درمان کرد.

---- درمان DNase بدون RNase را در محلول RNA بدست آمده انجام دهید و RNA می تواند مستقیماً پس از درمان برای آزمایشات بعدی مورد استفاده قرار گیرد ، یا می تواند توسط کیت های تصفیه RNA بیشتر تصفیه شود.

برای ظروف شیشه ای ، در دمای 150 درجه سانتی گراد به مدت 4 ساعت پخته می شود. برای ظروف پلاستیکی ، به مدت 10 دقیقه در 0.5 M NaOH غوطه ور شده ، سپس با آب عاری از RNase کاملاً شستشو داده و سپس استریل می شود تا RNase به طور کامل حذف شود. معرفها یا محلولهای مورد استفاده در آزمایش ، به ویژه آب ، باید عاری از RNase باشند. از آب بدون RNase برای تمام آماده سازی های معرف استفاده کنید (آب را به یک بطری شیشه ای تمیز اضافه کنید ، DEPC را به غلظت نهایی 0.1٪ (V/V) اضافه کنید ، یک شبه تکان دهید و در اتوکلاو).